神經干細胞培養的大致步驟

    神經干細胞是一類能生成神經組織貨源與神經組織、具有自我更新能力、并能通過不對稱分裂能生成不同于自身的細胞。迄今，人們從哺乳動物的胚胎和發育中的未成年個體、成年個體的諸多腦區以及脊髓中都成功地分離了神經干細胞。
    目前，神經干細胞的分離方法主要有三種：無血清培養基自然篩選法、流失細胞術分選法、免疫磁珠分選法。我司采用的是無血清培養基自然篩選法。
    無血清培養基自然篩選法是迄今應用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養基使成熟的神經細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養條件下存活并增殖的神經干細胞群體。首先將含神經干細胞的神經組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細胞，然后培養于含有特殊營養添加劑和促增殖因子的不含血清的培養液中。非神經干細胞在這種培養系統中由于營養缺陷無法較長時間地存活，而神經干細胞則適應該培養體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經過培養一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經球狀生長的神經干細胞群體。這種利用特殊培養基自然篩選神經干細胞方法的優點是：簡便易行，不需要特殊的儀器設備等條件，分離效率高，神經干細胞損傷小易于成活。
    神經干細胞在神經損傷及退行性病變等的替代治療有很好的應用前景，但人類胚胎神經組織來源的神經干細胞由于來源及倫理問題，使其應用受到一定限制；應用成體中的骨髓、脂肪等組織中存在的基質細胞，經誘導可分化為神經干細胞，并經誘導分化可形成神經樣細胞，由于其優點已引起廣泛深入的研究。兩者雖都可經誘導分化為神經樣細胞，但畢竟骨髓來源與神經來源干細胞起源不同，其能力及特性仍有一定的差別。對于骨髓來源的神經干細胞，其是否能zui終形成發揮功能作用的神經細胞，尚需進行更深入、細致的實驗研究。本實驗室研制的Cytokine神經干細胞培養基，對胚鼠室管膜神經干細胞和骨髓來源的基質細胞進行誘導培養，均可形成形態相似的大圓細胞，經RA等誘導分化，均可形成神經樣細胞，并表達神經細胞的標志蛋白，但兩種不同來源的神經干細胞在增殖能力等很多方面均有不同，其在形態上有何差異，嘗試以AFM來觀察兩種細胞，從形態上對兩者進行初步的比較研究。
    我司分離培養神經干細胞的步驟大致如下：
    （1） 取胎腦。
    （2）加Trypsin/EDTA消化，用吸管吹吸使細胞均勻分散均勻。
    （3） 離心除去Trypsin/EDTA。
    （4）加神經干細胞*培養基培養。
    當神經球較大或出現細胞貼壁分化時應及時傳代。傳代經過大致為：去除培養液；PBS洗滌；Trypsin/EDTA消化；離心，去上清；神經干細胞*培養基重懸；按比例接種。