人淋巴細胞分離液

人淋巴細胞分離液 人淋巴細胞來源于人外周血，可根據不同實驗目的可選擇密度梯度離心法、吸附分離法或其它特殊分離方法。Böyum在密度梯度離心法的基礎上提出通過使用Ficoll®甲泛影鈉溶液離心快速分離的方法，操作更方便、更快速。稀釋的血液在Ficoll®甲泛影鈉溶液中通過短時間的低速離心即可分層，紅細胞和粒細胞沉降至管底、淋巴細胞和血小板在中間形成2個分層。
人淋巴細胞分離液使用說明：
1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2.無菌轉移3mlLSM到15ml離心管中。
3.混合2ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2ml生理鹽水
4.仔細的將稀釋血液加入3mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5.室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細胞和多核白細胞同時可以在LSM上形成一層單核淋巴細胞。
6.吸出淋巴細胞上方2-3mm的血漿。
7.吸取淋巴細胞層以及它下面一半的LSM和轉移到另外的一個離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設定在既不損傷細胞又能沉淀細胞即刻，例如160–260xg（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8.用平衡鹽緩沖液清洗細胞，用適當的培養基重懸細胞。