PeproTech細胞因子常見問題解答

PeproTech研制出的無動物成分的重組蛋白(animal-free recombinant proteins)，是利用專有的無動物成分生產設施，在嚴格的無動物成分條件下生產出來，因此痕量的動物源性污染引發潛在問題的可能性被降至低，從而*達到臨床前研究和細胞治療用標準。PeproTech研發無動物成分的培養基添加物試劑盒(animal-free Media Supplement Kits)。這些試劑盒經改良設計，其中的無血清組分對多種哺乳動物細胞的生長有更好的維持能力。

優質的RUO細胞因子

 全長和*生物活性的RUO細胞因子是由我們經驗豐富的蛋白質科學家內部開發的。該過程從我們的分子生物學實驗室開始，進行基因設計和表達，然后到細胞銀行，進行發酵/細胞培養，純化，終進行QC測試。

大腸桿菌（E.coli）表達蛋白：

PeproTech擁有超過15,000平方英尺的發酵，蛋白質加工和凈化設備，能夠滿足客戶的需求。

細胞培養表達蛋白：

PeproTech擁有*的細胞培養和蛋白質純化設備，能夠提供糖基化的*生物活性蛋白。

常見問題 - RUO細胞因子

每個產品的相關信息均在該產品隨附的CoA(說明書)中，請仔細閱讀這些信息，以獲知溶解和存儲的方法。

1. 你們的蛋白產品的穩定性如何？ 

除非在產品說明書中特別注明，我們的所有產品均為凍干粉，在室溫條件下非常穩定。盡管如此，我們還是建議您將凍干產品保存在-20oC至-80oC。對于大多數產品，重懸后在4oC僅能短期保存。如想長期保存，請用含載體蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀釋已重懸的蛋白，然后分裝、凍存于-20oC至-80oC。分裝濃度要求不低于1 µg/ml，每管體積要求不小于10µl。務必注意，請避免反復凍融，因每次凍融均可能引起蛋白的部分變性。因此，我們建議分裝的蛋白溶液凍融不要超過1次。

2. PeproTech重組蛋白的內毒素水平如何？

PeproTech大部分無動物成分級別蛋白的內毒素水平均保證低于0.01 ng/µg蛋白，即0.1 EU/µg蛋白。對于大多數非無動物成分級別的蛋白，內毒素水平保證低于0.1 ng/µg蛋白，即1 EU/µg。其實，許多蛋白的實際內毒素含量均低于上面標稱的內毒素水平，具體信息請與我們的質量保證(QA)部門聯系。

3. 為什么我在管中看不到蛋白團塊？

與市場上的許多蛋白產品不同，PeproTech的產品中不含任何載體蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等)，并且常在含鹽量的溶液中凍干，結果是微量的蛋白在凍干過程中會沉積在管壁上，形成蛋白薄膜，有時肉眼觀察不到。我們建議，在打開管蓋前用小離心機快速離心20-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白團塊聚集于管底。盡管可能看不到蛋白團塊，但我們的質控程序保證每管中的蛋白含量準確無誤。

4. 哪些細胞因子有種屬交叉活性？

除少數例外，大多數人細胞因子對小鼠細胞均有活性，很多小鼠細胞因子也可作用于人，但反應的特異性可能低于對應的人細胞因子。IL-7等為數不多的人細胞因子作用于小鼠細胞時，甚至比對應的小鼠細胞因子活性還強。干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細胞因子的種屬特異性很強，與其它種屬細胞的交叉反應活性非常弱。相反，成纖維細胞生長因子(FGF)和神經營養素(neurotrophins)等高度保守，在不同動物種屬細胞上均呈現良好的生物學活性。

5. ED50和units/mg均用來表示比活性(specific activity)，兩者之間有什么關聯？

ED50的定義是可誘導50%大反應的細胞因子濃度，而比活性(specific activity)是單位重量蛋白樣品中所含的活性單位。比活性單位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能，且僅適用于劑量反應曲線為S形的蛋白。

6. 比活性單位(specific activity units)和活性的單位(International Units)之間有什么關聯？比活性單位和單位(IU)之間沒有直接的關聯，不能相互換算。

單位(IU)是與標準品的活性單位(即IU/ng)比對后得出的活性數值，后者是在世界衛生組織(WHO)領導的合作研究中確定的。WHO標準品由英國國家生物制品檢定所(NIBSC)制備和提供。

簡單地與標準品比對而得出的蛋白活性單位(IU)常會出現偏差，原因是每個蛋白廠家所用的活性檢測方法很難一致，從而導致與標準品比對后得到的單位(IU)值相互間不具可比性。想要實現真正的可比性，必須建立標準的活性檢測方法，以保證所得出的蛋白活性單位(IU)值僅與蛋白的質量有關，而與蛋白的來源無關。

7. PeproTech是怎樣得到蛋白活性的單位(IU)值的？

在可能的情況下，PeproTech通過將自己的產品與對應的WHO標準品在自已的生物活性測試中進行多次平行比對來得出單位(IU)值。多次對比可保證我們能夠排除因測試本身的不穩定性(如產品批次，使用方法和測試方案等的變異性)而導致的異常值的出現。經多次比對得出的結果可對我們產品的單位(IU)值進行可靠的定量。