MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案

MSC人間充質干細胞流式鑒定操作步驟

流程

準備細胞——抗體染色——上機檢測

1、準備細胞：取培養的細胞離心（300 g/5min），棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次，棄去上清，彈散細胞，細胞重懸到5×10⁶~10×10⁶之間。

2、MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案：

取100 ml的細胞于EP管或流式管內，分三管染色。

*管 陽性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APC，Anti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml。

第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml。

第三管同型對照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 ml，Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml，Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml。

配色依據：細胞治療協會間充質和組織干細胞委員會2006年提出了MSC鑒定的zui低標準，關于細胞表型的要求是表達CD90， CD105和CD73不表達CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR；陽性指標都需要染色，陰性指標一般選擇2-3個指標，因為是做細胞表型鑒定，所以要配齊同型對照。

3、加入相應的抗體后混勻，建議彈管子，盡量不用槍頭直接吹打，室溫避光孵育15 min，染色過程中再混勻一次。

4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細胞，離心300 g/5min。

5、棄去上清，彈散細胞，加入500 ml PBS重懸，上機檢測。

注意：1、同型對照是根據染色抗體的用量來計算的，所以每種同型對照可能加入量可能不一樣（具體可看后文同型對照章節的介紹）。

   2、先上機檢測同型對照管，各檢測通道以這一管的信號設為陰性，在上機檢測抗體染色管。

   3、zui后結果的顯示用峰圖來表示，每種抗體的檢測結果都與對應的同型對照染色結果疊加展示（ overlay ）。

MSC人間充質干細胞流式鑒定結果

注意：CD90表達量非常高，所以建議用FITC熒光染料，FITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補償，所以這三種染料一起染色不需調節補償，如果是做臍帶干細胞的鑒定，CD105抗體選擇SN6克隆號，其他克隆號染色結果不好（某些克隆號染不上）。

MSC人間充質干細胞流式配色抗體

MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。Biogems是PeproTech的流式抗體品牌，質高價惠，現正進行一系列*活動。

MSC人間充質干細胞流式配色抗體產品由重慶市華雅干細胞技術有限公司授權代理，。重慶市華雅干細胞技術有限公司以“專注干細胞研究，提升干細胞品質”為發展理念，專業從事干細胞基礎研究、干細胞再生醫學臨床應用研究及干細胞技術服務。